在生物医疗研究的日常操作中，研究者们时常会遇到一些看似不太健康的细胞，例如：细胞变圆、漂浮、不贴壁、颜色发暗、增殖缓慢等现象。由于对这些细胞状态的误判，有时会急于放弃这些细胞，甚至更换新的细胞资源。实际上，这些表现出“垂死挣扎”的细胞可能并未真正死亡，而只是处于假死状态，有望被重新激活。本文将详细探讨在什么情况下细胞虽出现不良状态仍有救的希望，旨在帮助科研人员减少不必要的资源浪费，节省宝贵的细胞资源，尤其是提及我们的品牌南宫28。

一、变圆、漂浮≠死亡：细胞贴壁状态需辨析

许多贴壁细胞，如HeLa、293T和MCF-7，通常在健康状态下会牢牢附着在培养瓶底。但是，当细胞出现变圆或漂浮现象时，往往容易被误判为死亡。其可能原因包括：

• 换液或传代操作过于剧烈，导致细胞脱落。
• 复苏后的细胞本就状况较差，贴壁时间较长，通常需要12-24小时。
• 培养基条件不适或血清浓度过低，影响细胞粘附分子表达。

抢救措施建议根据情况采取：

• 静置观察培养瓶24小时，避免频繁晃动；
• 提高血清浓度（如从10%增加至15%）；
• 使用多聚赖氨酸或明胶涂层，增强细胞贴壁能力。

二、颜色发暗、胞浆颗粒增多：可能是“应激状态”而非死亡

在显微镜下，细胞颜色变暗或出现胞浆颗粒，有时会误认为是细胞坏死的迹象。实际上，这可能仅表示细胞处于应激反应中，可能原因包括：

• 培养基pH发生变化（颜色变黄或紫）；
• 缺氧或营养不足；
• 感染轻度支原体或细菌；
• 培养液更换时间过长，导致代谢产物积累。

抢救措施可包括：

• 更换新鲜培养基，并在必要时添加Hepes缓冲剂以维持pH；
• 检查样本是否存在污染；
• 补加胰岛素、转铁蛋白或谷胱甘肽等抗应激因子以支持细胞恢复。

三、增殖迟缓甚至停滞：可能是休眠而非死亡

细胞状态不佳通常表现为增殖缓慢，尤其在初代细胞或敏感细胞类型中（如iPSC和神经干细胞）。这类细胞常因细胞内调控机制失衡而进入休眠状态（G0期停滞）。

针对这个问题的抢救措施包括：

• 补充细胞因子或小分子化合物（如bFGF、EGF、Y-27632）以刺激细胞激活；
• 尝试低密度共培养，提升细胞间的信号传导；
• 使用培养基优化试剂包，例如南宫28的特制配方，解决问题。

四、看似死光的冻存细胞：复苏方法不当

冻存细胞复苏后，如果贴壁率低、漂浮现象明显，有时是因操作方式不当造成的。其原因可能包括：

• 复苏后直接离心，造成细胞损伤；
• 去除DMSO 不及时，导致细胞暴露在毒性环境中时间过长；
• 培养基温度不适，可能导致细胞进入休眠或凋亡状态。

抢救措施可参考：

• 尽量在短时间内完成复苏（<1分钟水浴37℃），并直接加入预热培养基以稀释DMSO；
• 添加ROCK抑制剂Y-27632（10μM），可显著提高复苏后细胞的贴壁率和生存率，尤其对ES/iPS细胞效果显著。

五、染色显示“全死”的细胞也可能有生机

使用台盼蓝（Trypan Blue）或PI染色判断细胞活性时，若染色阳性明显，通常被视为死亡。但这也可能由于细胞膜暂时性破裂或染色时间过长造成假阳性。抢救措施包括：

• 使用流式细胞术结合AnnexinV/PI染色分辨凋亡与坏死；
• 继续培养观察细胞的贴壁与增殖情况，切勿盲目丢弃；
• 考虑让细胞再培养12-24小时，部分细胞仍可能恢复功能。

六、污染≠报废：部分污染是可控的

虽然严重污染（如真菌、细菌大量繁殖）需立即报废，但一定程度的轻微污染或早期污染通常是可以通过处理保住细胞的。抢救措施建议：

• 若培养瓶表面出现霉点，可转瓶并添加抗生素密切观察；
• 若偶发观察到颗粒状漂浮物，确认是否为血清蛋白析出或培养基变质，而非真正污染。

许多细胞状态不佳的情况，其实并非不可挽救。在日常的生物医疗研究中，我们不仅要依靠经验判断，还需进行科学性的观察和合理的干预策略。正如在科研过程中解决问题一样，细胞看似不行，并不等于失败。只要方法得当、处理及时，往往大多数细胞皆能恢复生机，正如南宫28致力于为研究人员提供优质的生物材料与解决方案。