抗体（antibody，Ab）是机体在体内受到外来分子、微生物等抗原物质刺激后，由B淋巴细胞或记忆细胞增殖分化为浆细胞所产生的免疫球蛋白（immunoglobulins，Ig）。抗体主要存在于血清中，同时也分布于组织液和外分泌液中。在免疫化学技术中，抗体的特异性鉴定是确保抗原-抗体反应专一性的基础。需要投稿国际期刊时，通常会准备相关数据，以验证抗体的特异性。

抗体与抗原的特异性结合原理在于抗体由V区和C区组成，其中V区的互补决定区（complementarity determining region, CDR）形成抗原结合槽，通过“锁-钥”（key-lock）的互补关系与相应抗原表位特异性结合。因此，不同的V区抗体可以识别并结合不同的抗原。

抗体特异性的四种鉴定方法

鉴定抗体的特异性主要有以下四种方法：

• 分子遗传法：对于基因编码清晰的蛋白，可以使用基因敲除模型、CRISPR-Cas9、RNA干扰等技术显著降低该蛋白的表达水平，然后应用待检抗体进行标记。如果观察到抗体标记强度减弱或消失，说明该抗体确实标记了相关蛋白。此法需注意基因敲除后可能不会立即影响蛋白水平，且抗体可能标记到与目标蛋白密切相互作用的其他蛋白。
• 独立抗体验证法：同一目标分子可以使用针对不同抗原决定簇的抗体进行标记。如果已经拥有经过特异性鉴定的其他抗体，并且其识别的结构位点与待检抗体不同，那么该抗体可作为良好的阳性对照。
• 正交法：此方法使用不同的技术互不影响地对抗体标记是否为目标分子进行鉴定。可通过质谱、色谱分离等技术与抗体标记平行实验，如果不同技术的结果一致，说明抗体具有特异性。
• 标签蛋白法：利用FLAG、V5等亲和标签或GFP等荧光偶联蛋白对待检抗体进行鉴定。如果抗体标记强度与待检抗体的标记强度一致，说明待检抗体具有特异性。

特异性选择的四个方面

在进行抗体选择时，需要考虑以下四个方面：

• 蛋白特异性：在选择抗体时需确保其针对需要检测的蛋白，尤其是重组蛋白的免疫原区域是否位于目标区域内。了解内源蛋白的剪切和修饰方式，有助于减少交叉反应的可能性。
• 种属特异性：不同物种之间同种蛋白可能存在差异，因此在选择抗体时要注意参考说明书中注明的可反应种属信息。
• 实验方法特异性：由于不同实验方法对蛋白样品的处理方式不同，可能导致抗体的识别能力差异，需选取适合特定实验的抗体。
• 标记物的特异性：通常，实验操作中不使用带有标记的一抗，而是通过二抗类试剂标记。然而，在流式实验等基于仪器分析的实验中，可能需要直接标记的一抗，需特别注意所使用工具能够检测的荧光范围。

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