南宫28的赭曲霉毒素检测试剂盒使用说明书（酶联免疫法）详细介绍了该产品的原理、用途、技术指标、组成及实验步骤等关键信息。

1. 原理及用途

赭曲霉毒素是一类由曲霉菌属和青霉菌属某些种类所产生的二级代谢产物。其中，赭曲霉毒素A在自然界中的分布最广，毒性也最强，对人类以及动植物的健康造成了显著影响。南宫28的试剂盒利用间接竞争ELISA方法，对米面、花生、大豆等谷物及饲料样品中的赭曲霉毒素（Ochratoxins A，OTA）进行检测。该试剂盒包括预包被偶联抗原的酶标板、辣根酶标记物、抗体、标准品和其他配套试剂。检测过程中，样品中的赭曲霉毒素与酶标板上的预包被偶联抗原竞争抗赭曲霉毒素抗体。随后，加入酶标记物，通过TMB底物显色，最终根据样本的吸光度与标准曲线的比较，得出样本中赭曲霉毒素的残留量。

2. 技术指标

南宫28的试剂盒具有以下技术指标：

• 灵敏度：1 ppb (ng/ml)
• 反应模式：37℃反应时间为30分钟
• 检测下限：谷物 5 ppb，饲料 10 ppb
• 交叉反应率：赭曲霉毒素A 100%
• 样本回收率：谷物及配合饲料 85% ± 15%

3. 试剂盒组成

南宫28的试剂盒包括：

• 酶标板（96孔）
• 标准品（黑盖）：各1ml，分别为0 ppb、1 ppb、3 ppb、9 ppb、27 ppb、81 ppb
• 酶标记物（红盖）：11 ml
• 抗体工作液（蓝盖）：55 ml
• 底物液A（白盖）：6 ml
• 底物液B（黑盖）：6 ml
• 终止液（黄盖）：6 ml
• 20×浓缩洗涤液（白盖）：40 ml
• 说明书：1份
• 盖板膜：1张
• 自封袋：1个

4. 需要的器材和试剂

所需的仪器包括酶标仪、打印机、均质器、振荡器、离心机、刻度移液管和精密天平（感量0.001g）。所需的微量移液器为单道20µl-200µl、100µl-1000µl和多道300µl。

5. 样本前处理

在进行样本处理前，确保实验器具洁净并使用一次性吸头，以防止污染干扰实验结果。样本的处理步骤包括：

5.1 食品类谷物与大豆样本处理

1. 称取4g粉碎样品于50ml离心管中，加入10ml 70%甲醇，振荡5分钟，在室温下以4000转/分离心10分钟；
2. 取1ml上清，加入1ml 0.1M碳酸氢钠溶液，振荡混合；
3. 取50µl进行分析。样本稀释倍数：5，检测下限：5 ppb。

5.2 饲料样本处理

1. 称取2g粉碎样品于50ml离心管中，加入10ml 70%甲醇，振荡5分钟，在室温下以4000转/分离心10分钟；
2. 取1ml上清，加入1ml 0.1M碳酸氢钠溶液，振荡混合；
3. 取50µl进行分析。样本稀释倍数：10，检测下限：10 ppb。

6. 酶联免疫试验步骤

根据南宫28试剂盒的说明，取出试剂并在室温下平衡30分钟。注意：若洗涤液冷藏时出现结晶，需恢复至室温以确保充分溶解。在ELISA分析中，洗板需彻底，混合需均匀，以保证实验的再现性。

6.1 编号

每个样本和标准品对应的微孔需按序编号，并记录位置，以确保实验的准确性。

6.2 加样反应

向每个微孔中添加50µl的标准品或样本，然后再加入50µl的抗体工作液，轻轻振荡混合，反应30分钟。

6.3 洗涤与加酶

仔细洗涤后加入100µl的酶标记物，再次进行反应，并在最后显色后使用终止液终止反应。

7. 结果分析

首先计算样本的百分吸光率，随后通过标准曲线将样本浓度与OD值对应，并得出实际浓度。使用南宫28的专业分析软件会使样本分析变得更加迅速和准确。

8. 注意事项

在使用过程中，应关注以下几点：

• 确保室温不低于25℃，试剂及样本需恢复到室温，避免OD值偏低。
• 避免在洗板过程中出现孔干燥，以确保标准曲线的线性。
• 在所有孵育过程中，使用盖板膜避免光线直接照射。
• 避免使用过期试剂盒或不同批次之间的交叉。

9. 储藏及保存期

将南宫28试剂盒在2-8℃下保存，避免冷冻。其有效期为1年，具体生产日期见包装盒。