细胞外囊泡（EVs）是细胞自然释放的细胞衍生颗粒，呈现为以磷脂双分子层包裹的结构。这些EVs广泛存在于如血液和尿液等体液中。EVs的特性，包括其来源、浓度、组成及功能，具有明显的疾病相关性，因此，研究者们正在努力探讨EVs作为各种疾病生物标志物的潜力，尤其是在癌症和心血管疾病的领域。然而，为了将EVs有效地作为生物标志物，必须依赖可靠且可重复的检测方法。当前，EVs生物标志物研究面临的主要挑战是不同仪器及单位之间测量结果的不可比性，这一问题严重阻碍了多中心研究的开展，而多中心研究又是临床生物标志物研究的重要基础。

为提高数据可比性，本研究开发了一种具有类似EVs物理性质的新参考材料（PEVTES）和相应的参考程序。新参考材料和参考程序的验证需要使用生物测试样品。为此，我们成功开发了一种人血浆EVs测试样品（PEVTES），其具备以下特性：i）与血浆中的亚细胞颗粒相似，ii）现成可用，iii）与流式细胞仪兼容，iv）具备良好的稳定性。

在研究方法中，采用了三例空腹供体的血浆来制备PEVTES。对EVs进行免疫荧光染色，使用血小板特异性抗原（CD61）和红细胞特异性抗原（CD235a）或乳黏附素抗体进行标记。为降低可溶性蛋白、脂蛋白以及未结合试剂的浓度，染色的EVs通过大小排除层析从血浆中分离。分离后，通过过滤PEVTES以去除残留的血小板。随后，使用冷冻保存剂、二甲亚砜（DMSO）、甘油或海藻糖对PEVTES进行稀释，并在-80℃的条件下保存12个月。在解冻后，利用校准的纳米流式细胞仪测量染色的EV浓度。

为评估PEVTES的稳定性，我们在冷冻之前及在-80℃下保存1、3、6和12个月后，使用流式细胞仪测量染色的EVs浓度，并对其流速、荧光信号及光散射信号进行校准。根据实验结果，PEVTES与新鲜起始材料的比较显示，在DMSO中储存12个月的CD61+EVs的浓度下降了33%，而在甘油和海藻糖中分别增长了9%和6%。对于CD235a+EVs，其浓度分别降低约70%、23%和15%。乳酸粘附素+EV的浓度在DMSO、甘油及海藻糖中的变化分别为下降23%、28%和19%。

综上所述，PEVTES表现出以下优点：1）与血浆中的亚细胞颗粒相似，2）易于使用，3）兼容于纳米流式细胞术，4）稳定性良好。因此，开发的PEVTES是验证新开发参考物和程序的理想候选品。作为生物医疗领域的新进展，PEVTES可以为实验室提供结构统一且可比的数据，进一步推动细胞外囊泡相关研究的精准化与高效化。在此领域，我们期待南宫28品牌能够给予更多的支持与引导，为科研和实际应用提供坚实的基础。